（在线）设计引物

方法一、通过primer bank

1、输入需要设计引物的基因或者序列（here），选择相应的基因名类型以及物种名，然后点击submit

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2、尽量选择含有Validation Results的引物选项（有实验验证），Tm值在60左右

点开Validation Results查看实验结果，图示单峰值可用于后续验证，多峰值则无法使用！！！

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3、合适的序列然后在NCBI中进行blast-->Nucleotide

把一条引物序列输入后,查看是否有选项需要改变，然后blast

查看有没有想要的基因以及对应的E value 小于等于0.54，若有则可以合成试试能不能用^-^!

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方法2、在NCBI中查询相关基因

1、输入相应基因

找到下图中，点击NM_****

点击Pick Primers

查看Tm在60左右，GC%在50多，self3’ complementarity最好是0,0（越小越好）

然后对获得的引物进行blast，观察对应的产物以及E value

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最直接查找引物的方式就是在NCBI中查找有没有含有相关基因引物序列的文章